Флуоресценттик фильтр флуоресценттик микроскоптун маанилүү компоненти болуп саналат.Кадимки системада үч негизги чыпка бар: дүүлүктүрүү чыпкасы, эмиссия фильтри жана дихроикалык күзгү.Алар, адатта, микроскоптун ичине чогуу киргизилиши үчүн, бир кубга пакеттелген.
Флуоресценттик чыпка кантип иштейт?
Excitation Filter
Козголгон чыпкалар белгилүү бир толкун узундуктагы жарыкты өткөрөт жана башка толкун узундуктарын бөгөттөйт.Алар бир гана түстү өткөрүү үчүн чыпканы тууралоо менен ар кандай түстөрдү өндүрүү үчүн колдонулушу мүмкүн.дүүлүктүрүү чыпкалары эки негизги түрү болот - узун өтүү чыпкалары жана тилке өтүү чыпкалары.Демейде дүүлүктүргүч флуоресценциянын башка булактарынын дүүлүгүүсүн минимумга түшүрүүчү жана флуоресценциянын эмиссия диапазонундагы дүүлүктүрүүчү жарыкты бөгөттөп, флюорофор сиңирүүчү толкун узундуктарын гана өткөрүүчү тилкелүү чыпка болуп саналат.Сүрөттөгү көк сызыктан көрүнүп тургандай, BP 460-495, бул 460-495нм флуоресценция аркылуу гана өтө алат дегенди билдирет.
Ал флуоресценттик микроскоптун жарыктандыруу жолунда жайгаштырылат жана флюорофордук дүүлүктүрүүчү диапазондон башка жарык булагынын бардык толкун узундуктарын чыпкалайт.Фильтрдин минималдуу өткөрүүсү сүрөттөрдүн жарыктыгын жана жаркырагандыгын аныктайт.Ар кандай дүүлүктүрүүчү чыпкалар үчүн эң аз дегенде 40% өткөргүч сунушталат, мындай өткөргүч идеалдуу >85% болот.дүүлүктүрүүчү чыпкасынын өткөрүү жөндөмдүүлүгү толугу менен флюорофор дүүлүктүрүү диапазонунда болушу керек, мында чыпканын борбордук толкун узундугу (CWL) флюорофордун эң жогорку толкун узундугуна мүмкүн болушунча жакын болушу керек.дүүлүктүрүү чыпкасынын оптикалык тыгыздыгы (OD) фон сүрөтүнүн караңгылыгын аныктайт;OD - чыпка берүү диапазонунан же өткөрүү жөндөмдүүлүгүнөн тышкаркы толкун узундуктарын канчалык жакшы бөгөттөөнүн өлчөмү.Минималдуу OD 3.0 сунушталат, бирок OD 6.0 же андан жогору идеалдуу.
Эмиссия чыпкасы
Эмиссия фильтрлери үлгүдөн керектүү флуоресценцияны детекторго жетүү үчүн кызмат кылат.Алар кыска толкун узундуктарын бөгөттөп, узун толкундар үчүн жогорку өткөрүмдүүлүккө ээ.Чыпка түрү ошондой эле сан менен байланыштырылган, мисалы, сүрөттөгү BA510IF (тоскоолдук тосмо чыпкасы), ал белгилөө анын максималдуу өткөрүлүшүнүн 50% толкун узундугуна тиешелүү.
Ошол эле сунуштар дүүлүктүрүүчү чыпкаларга эмиссия чыпкаларына да тиешелүү: минималдуу өткөрүү, өткөрүү жөндөмдүүлүгү, OD жана CWL.Идеалдуу CWL, минималдуу өткөрүү жана OD айкалышы менен эмиссия чыпкасы мүмкүн болгон эң терең бөгөттөө менен мүмкүн болгон эң жаркыраган сүрөттөрдү камсыз кылат жана эң начар эмиссия сигналдарын аныктоону камсыз кылат.
Dichroic Mirror
Дихроикалык күзгү дүүлүктүрүүчү чыпка менен эмиссия фильтринин ортосуна 45° бурчта жайгаштырылат жана детекторго карата эмиссия сигналын өткөрүп жатканда дүүлүктүрүүчү сигналды флюорофор тарапка чагылдырат.Идеалдуу дихроикалык фильтрлер жана нур бөлгүчтөр максималдуу чагылдыруу менен максималдуу өткөрүүнүн ортосунда кескин өтүүгө ээ, дүүлүктүрүүчү чыпканын өткөрүү жөндөмдүүлүгү үчүн >95% чагылуу жана эмиссия фильтринин өткөрүү жөндөмдүүлүгү үчүн >90% чагылдыруу менен.Адашкан жарыкты азайтуу жана флуоресценттик сүрөт сигналынын ызы-чуу катышын максималдаштыруу үчүн флюорофордун кесилишкен толкун узундугун (λ) эске алуу менен чыпканы тандаңыз.
Бул сүрөттөгү дихроикалык күзгү DM505 болуп саналат, анткени 505 нанометр бул күзгү үчүн максималдуу өткөрүүнүн 50% толкун узундугу болуп саналат.Бул күзгү үчүн өткөрүү ийри сызыгы 505 нмден жогору жогорку өткөрүүнү, 505 нанометрдин сол жагына өткөрүүнүн кескин төмөндөшүн жана 505 нанометрдин сол жагында максималдуу чагылдырууну көрсөтөт, бирок дагы эле 505 нмден төмөн кандайдыр бир өткөрүмдүүлүккө ээ болушу мүмкүн.
Узак өтүү жана тилкелүү өтүү чыпкаларынын ортосунда кандай айырма бар?
Флуоресценттик чыпкаларды эки түргө бөлүүгө болот: узун өтүүчү (LP) жана тилкелүү (BP).
Узун өтүүчү чыпкалар узун толкундарды өткөрүп, кыскараактарын бөгөттөйт.Кесилген толкун узундугу 50% чокусу өткөрүүнүн мааниси, ал эми кесилгенден жогору бардык толкун узундуктары узун өтүүчү фильтрлер аркылуу өткөрүлөт.Алар көп учурда дихроикалык күзгүдө жана эмиссия фильтрлеринде колдонулат.Колдонмо максималдуу эмиссияны чогултууну талап кылганда жана спектрдик дискриминация талап кылынбаганда же зарыл болбогондо, узак өтүүчү чыпкаларды колдонуу керек, бул көбүнчө фондук автофлуоресценциянын салыштырмалуу төмөн деңгээли бар үлгүлөрдөгү бир эмитенттүү түрдү генерациялаган зонддорго тиешелүү.
Толкун өткөрүүчү чыпкалар белгилүү бир толкун узундугунун тилкесин гана өткөрүп, башкаларын бөгөттөйт.Алар флюорофордун эмиссия спектринин эң күчтүү бөлүгүн гана өткөрүүгө мүмкүндүк берүү менен кайчылашууну азайтат, автофлуоресценттик ызы-чууларды азайтат жана ошентип, узак өтүүчү фильтрлер сунуш кыла албаган жогорку фондук автофлуоресценция үлгүлөрүндөгү сигналдын ызы-чуу катышын жакшыртат.
BestScope флуоресценттик чыпкаларынын канча түрүн бере алат?
Чыпкалардын кээ бир кеңири таралган түрлөрүнө көк, жашыл жана ультрафиолет чыпкалары кирет.Таблицада көрсөтүлгөндөй.
| Фильтр топтому | Excitation Filter | Dichroic Mirror | Тоскоолдук чыпкасы | LED лампа толкун узундугу | Колдонмо |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485нм | ·FITC: Fluorescent антитело ыкмасы · Апельсин кислотасы: ДНК, РНК ·Аурамин: кургак учук таякчасы ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535нм | ·Rhodamine, TRITC: Fluorescent антитело ыкмасы · Пропидий йодид: ДНК · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365нм | ·Авто-флуоресценттик байкоо ·DAPI: ДНКны боёо ·Hoechest 332528, 33342: хромосомаларды боёо үчүн колдонулат |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405нм | · Катехоламиндер ·5-гидрокситриптамин · Тетрациклин: Скелет, Тиш |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640нм | ·Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Флуоресценцияны алууда колдонулган чыпка топтомдору флуоресценция колдонмолорунда колдонулган негизги толкун узундуктарынын тегерегинде иштелип чыккан, ал эң көп колдонулган флуорофорлорго негизделген.Ушул себептен улам, алар ошондой эле DAPI (көк), FITC (жашыл) же TRITC (кызыл) чыпка кубиктери сыяктуу элестетүү үчүн арналган флюорофордун аты менен аталган.
| Фильтр топтому | Excitation Filter | Dichroic Mirror | Тоскоолдук чыпкасы | LED лампа толкун узундугу |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485нм |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365нм |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535нм |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450нм |
| Техас Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560нм |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560нм |
Флуоресценция чыпкасын кантип тандайсыз?
1. Флуоресценция чыпкасын тандоо принциби флуоресценция/чыгаруу жарыгын мүмкүн болушунча сүрөттөө учу аркылуу өткөрүү жана сигналдын ызы-чуу катышын алуу үчүн бир эле учурда дүүлүктүрүү жарыгын толугу менен бөгөттөө болуп саналат.Айрыкча, multiphoton дүүлүктүрүү жана жалпы ички чагылдыруу микроскоп колдонуу үчүн, алсыз ызы-чуу, ошондой эле сүрөттөө таасири үчүн чоң тоскоолдук жаратат, ошондуктан сигнал ызы-катышы үчүн талап жогору.
2. Флюорофордун дүүлүгүү жана эмиссия спектрин билүү.Кара фон менен жогорку сапаттагы, жогорку контрасттуу сүрөттү түзүүчү флуоресценттик чыпка топтомун куруу үчүн дүүлүктүрүү жана эмиссия фильтрлери флюорофордун дүүлүктүрүүчү чокуларына же эмиссияларына туура келген аймактарда минималдуу өткөрмө тилкелүү толкуну менен жогорку өткөрүүнү камсыз кылышы керек.
3. Флуоресценттик фильтрлердин туруктуулугун карап көрөлү.Бул чыпкалар "күйүп кетишине" алып келиши мүмкүн болгон ультра кызгылт көк (УК) нурларды пайда кылган интенсивдүү жарык булактарын өткөрбөшү керек, айрыкча дүүлүктүргүч чыпка, анткени ал жарык булагынын толук интенсивдүүлүгүнө дуушар болот.
Ар кандай флуоресценттик үлгү сүрөттөрү
Ресурстар Интернетте чогултулуп, уюштурулуп, окуу жана баарлашуу үчүн гана колдонулат.Эгерде кандайдыр бир бузуу болсо, өчүрүү үчүн биз менен байланышыңыз.
Посттун убактысы: 2022-жылдын 09-декабрына чейин